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细胞外基质、黏附与连接

多细胞组织的秩序建立在三类连续界面上:细胞以黏附分子识别邻居,以连接复合物把膜两侧的骨架接成受力网络,又以细胞外基质(extracellular matrix,ECM)规定组织的材料性质。细胞连接同时控制旁细胞通透性、膜蛋白分区、机械负荷传递和局部信号;ECM 则是由细胞合成、装配并持续改造的蛋白质—多糖网络。1

动物组织、植物组织和不同无脊椎动物谱系使用的分子元件各有差异,却都要形成选择性边界、跨细胞传递力、允许受控交换,并感知周围材料的组成和力学状态。动物细胞连接、黏附分子、ECM、糖萼和植物细胞壁由此可放在共同的组织尺度下比较。2

连接复合物的功能分工

细胞连接的名称来自其超微结构、跨膜分子和胞内骨架耦联方式。一个上皮细胞可以同时拥有多类连接,它们沿顶端—基底轴呈有偏向但可变的分布,并在发育、损伤和迁移中重新组织。下表列出的骨架对象是各连接的主要受力耦联结构,其他骨架或信号蛋白也可参与。

连接或结构 主要跨膜元件 胞内或胞外耦联 核心任务 常见分布
紧密连接 claudin、occludin、JAM ZO 蛋白与 actin 皮层 调节旁细胞通路,维持膜域分隔 脊椎动物上皮、内皮细胞间隙的顶端侧
黏着连接 classical cadherin catenin、vinculin 与 actin 细胞间黏附、张力传递与形态发生 上皮黏着带、组织重排界面
桥粒 desmoglein、desmocollin plakoglobin、plakophilin、desmoplakin 与中间丝 分散细胞间拉伸和剪切 表皮、心肌等高负荷组织
黏着斑 integrin talin、kindlin、vinculin、paxillin、FAK 与 actin 细胞—ECM 黏附、牵引与机械感知 迁移细胞和多种基质接触面
半桥粒 integrin \(\alpha6\beta4\)、collagen XVII plectin、BP230 与角蛋白中间丝;胞外连 laminin-332 把上皮固定到基底膜 受摩擦上皮的基底面
缝隙连接 connexin 组成的 connexon 细胞骨架和调节蛋白;相邻半通道对接 离子和小分子的细胞间通道 多种脊椎动物组织
胞间连丝 连续质膜与 ER 来源的 desmotubule 胞质套筒、壁颈部胼胝质和调节蛋白 植物细胞间共质体交换 穿过相邻植物细胞壁

无脊椎动物常以有隔连接(septate junction)承担上皮封闭,并以内连接蛋白(innexin)组成细胞间通道。泛连接蛋白(pannexin)与 innexin 同源,在脊椎动物中通常形成向细胞外开放的单膜通道,功能上区别于标准缝隙连接。名称相近的连接要由跨膜蛋白、所接骨架和所在生物类群共同界定。3

上皮屏障与极性

紧密连接与选择性旁细胞通路

紧密连接把相邻细胞膜拉近成连续的带状网络。claudin 是形成连接索并决定离子选择性的核心成分,不同 claudin 组合可形成带电孔道,也可加强屏障;occludin、JAM 和 tricellulin 等则参与调节、三细胞角封闭和连接稳定。claudin-1 或 claudin-2 在缺乏内源紧密连接的细胞中即可重建连接索,直接支持其结构核心地位。4

上皮的“封闭”表现为可调的选择性通透。肾小管、肠道和血管内皮表达不同 claudin,因而具有不同电导和分子通量;三细胞交界、炎症信号和细胞骨架张力还会改变有效通透性。血脑屏障的低旁细胞通量来自专门化内皮及周细胞、星形胶质细胞足突和基底膜共同组成的神经血管单元。

紧密连接还具有“栅栏”作用:它限制部分膜脂和膜蛋白在顶端域与基底外侧域之间自由混合,使定向转运和分泌可以长期维持。膜内扩散本就会受皮层、蛋白复合物与膜域限制,相关物理基础见受限的侧向运动

黏着连接与上皮张力

经典钙黏蛋白(classical cadherin)的胞外结构域在 Ca\(^{2+}\) 存在时保持刚性并与邻细胞 cadherin 结合;胞内尾部通过 \(\beta\)-catenin、p120-catenin 和 \(\alpha\)-catenin 接入肌动蛋白—肌球蛋白(actomyosin)皮层。上皮细胞中的黏着带因此能把单个细胞的收缩传到相邻细胞,使细胞顶端收缩、折叠、延伸和集体迁移成为组织尺度的协同行为。

\(\alpha\)-catenin 对 actin 的结合会随受力状态改变,vinculin 等蛋白也可在张力下被招募。cadherin 聚簇、皮层流动、连接更新与组织几何共同赋予黏着连接动态的黏附和机械响应。力依赖的 \(\alpha\)-catenin—actin 结合已由单分子和细胞实验直接解析。5

承载负荷的细胞—细胞与细胞—基质界面

桥粒把相邻细胞的 cadherin 家族蛋白接到角蛋白或结蛋白(desmin)中间丝。desmoglein 与 desmocollin 在细胞外对接,plakoglobin、plakophilin 和 desmoplakin 在膜内侧形成致密斑。中间丝由此从一个细胞跨连接延伸到另一个细胞,在表皮受摩擦或心肌反复收缩时把局部应力分散到更大范围。桥粒蛋白还参与信号与组织分化。

半桥粒位于上皮基底面。integrin \(\alpha6\beta4\)、collagen XVII、plectin 和 BP230 把角蛋白接到基底膜中的 laminin-332;它与桥粒都连接中间丝,但一端指向 ECM 而非相邻细胞。遗传缺陷或自身抗体破坏这一轴线时,组织可沿特定层面分离,这种“裂隙出现在哪里”的现象反过来证明连接的分层结构。

黏着斑则以整联蛋白(integrin)异二聚体为跨膜核心,把纤连蛋白(fibronectin)、胶原蛋白(collagen)或层粘连蛋白(laminin)等基质配体接到 actin。talin 和 kindlin 激活 integrin 并连接其胞质尾部,vinculin、paxillin、黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)等随后组织受力和信号复合物。talin 杆状区受拉伸时可暴露隐藏的 vinculin 结合位点,为分子构象记录受力状态提供了直接证据。6

这些界面与迁移细胞的突出—黏附—牵引循环连续相接。黏附过弱时细胞难以获得牵引,过强又会妨碍后缘回收;三维基质中的孔隙、配体密度、纤维取向和细胞变形也会参与调节。因此,迁移能力和有效黏附强度需要结合黏着斑动力学、牵引力和环境共同判断。

黏附分子的识别语法

钙黏蛋白(cadherin)、整联蛋白、选择素(selectin)和免疫球蛋白超家族(immunoglobulin superfamily,IgSF)构成常见的细胞黏附分子体系。它们可在稳定连接中长期驻留,也可产生短暂接触;同一种分子还可能在不同组织承担不同任务。

cadherin 多为 Ca\(^{2+}\) 依赖的同类结合分子。细胞群分选既受 cadherin 类型和表达量影响,也受皮层张力、极性及其他黏附系统影响。发育或癌变中的上皮—间充质转变(epithelial–mesenchymal transition,EMT)涉及转录、骨架、极性、ECM 和代谢的协调重排,E-cadherin 的表达只是其中一个读出。

selectin 识别特定糖链,在血流剪切下形成快速生成又快速断裂的键,使白细胞能够捕获并沿血管内皮滚动。IgSF 成员通常不依赖 Ca\(^{2+}\),可作同类或异类结合;NCAM、L1-CAM、ICAM 和 VCAM 等分别参与神经组织、免疫细胞与血管界面。滚动之后的活化和跨内皮迁移还需要趋化信号与 integrin 状态转换,完整免疫募集机制见免疫学

integrin 由 \(\alpha\)\(\beta\) 亚基组成,既接受胞内 talin/kindlin 驱动的由内向外(inside-out)激活,也把配体结合和力学信息以由外向内(outside-in)方式传回细胞。不同 integrin 识别不同配体和序列;精氨酸—甘氨酸—天冬氨酸(Arg-Gly-Asp,RGD)是 fibronectin 等若干配体的重要基序,其他 collagen、laminin 与 integrin 组合使用不同识别界面。细胞脱离适当基质后可触发失巢凋亡(anoikis),依赖程度随细胞类型、分化状态和培养环境而变;悬浮生长的意义也需结合这些背景判断。7

缝隙连接与直接胞质通讯

六个连接蛋白(connexin)亚基在一个细胞膜内组成连接子(connexon),两个相邻细胞的 connexon 对接为连续水相通道。connexon 可由同一种或多种 connexin 构成,对接后又可形成同型或异型通道;组成差异改变电导、选择性、门控和周转。通道允许离子以及某些小代谢物和第二信使直接交换,使心肌、平滑肌、部分神经网络和代谢耦联组织同步活动。Cx26 通道的结构研究显示了贯穿两层膜的孔道及其亚基界面。8

膜电位、胞内 pH、Ca\(^{2+}\)、磷酸化和机械状态都可改变通道开放概率。分子的大小、形状、电荷和 connexin 组成共同决定其通透性,阈值因通道类型而异。染料扩散、双细胞电压钳或局部光漂白恢复能够报告细胞间耦联,但荧光扩散还会受胞质结合、细胞体积和通道数量影响。

化学突触以囊泡释放、细胞外扩散和受体响应跨越突触间隙,在两细胞保持胞质分隔的条件下传递信号。突触前释放、受体动力学和可塑性见神经科学

动物细胞外基质的材料组成

胶原与弹性蛋白

collagen 家族为 ECM 提供抗拉骨架。单条 \(\alpha\) 链采用左手多聚脯氨酸 II(polyproline II)样构象,三条链再缠绕为右手三股螺旋;Gly-X-Y 重复使每第三位的 glycine 能容纳于螺旋中心,proline 和 hydroxyproline 则有助于稳定构象。高分辨率模型肽结构由此揭示了单链与三聚体两个层级。9

分泌型原纤维胶原(fibrillar collagen)在粗面内质网内完成信号肽去除、proline/lysine 羟化、部分 glycosylation 和从 C 端开始的三股螺旋装配,以前胶原(procollagen)形式经 Golgi 输出。胞外 N、C 前肽被切除后形成原胶原(tropocollagen),随后排列为原纤维并经赖氨酰氧化酶(lysyl oxidase)催化共价交联。维生素 C 缺乏会影响羟化;不同 Ehlers–Danlos 综合征亚型可涉及 collagen 合成、加工或装配的不同环节。I、II、III 型多形成原纤维,IV 型形成基底膜网络,VII 型组成锚定纤维,结构类别比单纯按组织罗列更能解释功能。

弹性蛋白(elastin)赋予大动脉、肺和弹性组织可逆伸展能力。细胞把原弹性蛋白(tropoelastin)沉积到原纤蛋白(fibrillin)微原纤维支架上,lysyl oxidase 促成 desmosine 等交联;疏水区在拉伸后趋向回缩,使网络反复储存和释放机械能。elastin、fibrillin 与 collagen 的比例、交联和空间组织共同决定组织的弹性曲线。10

糖胺聚糖与蛋白聚糖的水合相

糖胺聚糖(glycosaminoglycan,GAG)由重复二糖组成,密集羧基和硫酸基吸引反离子与水,形成占据较大体积的水合相。多数 GAG 含 amino sugar 与 uronic acid,角质素硫酸(keratan sulfate)是重要例外;多数硫酸化 GAG 在 Golgi 装配到核心蛋白(core protein)上,常经 xylose—serine 连接区起始,keratan sulfate 则使用不同连接方式。透明质酸(hyaluronan)不硫酸化,不共价连接 core protein,并由质膜上的透明质酸合酶(hyaluronan synthase)直接向细胞外合成。

core protein 与 GAG 链构成蛋白聚糖(proteoglycan)。聚集蛋白聚糖(aggrecan)等可借 hyaluronan 形成巨大聚集体,使软骨抵抗压缩;基底膜蛋白聚糖(perlecan)是基底膜的重要组分;细胞表面的多配体蛋白聚糖(syndecan)还能与生长因子、黏附分子和骨架相接。水合、孔隙和配体结合三种性质使 proteoglycan 同时参与承载、过滤和信号呈递。

纤维连接蛋白与层粘连蛋白的装配

fibronectin 是由二硫键连接的二聚体,具有 integrin、collagen、硫酸乙酰肝素(heparan sulfate)等结合模块。可溶 fibronectin 与 integrin 结合后,细胞张力拉开部分模块并暴露自结合位点,促使其逐步装配为不溶纤维;Rho 驱动的 actomyosin 收缩可调节这一过程。11 细胞施力、分泌和降解由此持续组织 ECM 纤维。

laminin 是 \(\alpha\)\(\beta\)\(\gamma\) 链组成的异三聚体,不同链组合形成具有组织特异性的亚型(isoform)。laminin 可聚合为网络,并通过 integrin、dystroglycan 等受体连接细胞;与 collagen IV、nidogen 和 perlecan 协同构成基底膜。不同 laminin isoform 通过各自受体和结合界面发挥作用。

基底膜与细胞表面糖萼

基底膜是高度组织化的薄层 ECM,主要由 laminin 网络和 collagen IV 网络构成,并以 nidogen、perlecan 等连接和调节。它位于上皮、内皮、肌细胞、Schwann cell 与 adipocyte 等细胞表面,既提供承载和极性线索,也参与肾小球过滤、干细胞 niche、轴突再生路径和组织修复。collagen IV 缺失小鼠可完成早期基底膜装配,却在组织受力增加后失去稳定性,说明“建立网络”和“赋予长期机械完整性”是可分的功能。12

糖萼位于质膜外侧,由膜糖蛋白(glycoprotein)、糖脂(glycolipid)、proteoglycan 的糖链及其结合的可溶成分共同形成。它的厚度和组成随细胞类型、流体剪切与酶切动态变化;负电荷、空间排斥和水合作用调节分子接近,特异糖链又参与凝集素(lectin)识别。血管内皮糖萼还把流动环境与膜受体联系起来。糖萼是与膜成分连续相连的异质动态层,其读出必须结合固定方法和成像尺度。

ECM 重塑与机械转导

ECM 的状态由合成、交联、纤维组装、蛋白水解和内吞回收共同决定。成纤维细胞(fibroblast)是许多结缔组织的重要基质来源,上皮细胞、内皮细胞、肌细胞、脂肪细胞和免疫细胞也能产生或改造各自微环境。基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)、解整联蛋白样金属蛋白酶与血小板反应蛋白基序(a disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs,ADAMTS)等蛋白酶可开放迁移通道或释放被基质束缚的信号;其抑制剂、局部活化和底物可及性共同限制降解范围。

细胞通过 integrin—talin—actin 轴向基质施力,并读取基质刚度、黏弹性、纤维取向和配体间距。整联蛋白怎样经 FAK/Src、Rho 和其他效应器把受力状态接入生化网络,见整联蛋白信号。培养基质弹性可显著改变间充质干细胞的形态、张力和分化倾向,是机械微环境影响细胞状态的经典实验;这一偏向还受培养系统、细胞来源和其他信号共同调节。13

机械转导也存在反馈。张力可促进黏着斑成熟和 fibronectin 展开,细胞随后分泌、交联或降解更多 ECM,新的材料性质再改变细胞行为。组织中的应力还由邻细胞连接、液体压力和几何约束分担,因此二维硬基底上的铺展面积或黏着斑大小只反映特定培养条件下的机械状态。

脂肪组织中的细胞—基质界面

白色脂肪细胞(white adipocyte)通常由一个大脂滴占据主要胞质,细胞核和薄层胞质被推向周缘;棕色脂肪细胞(brown adipocyte)含多个较小脂滴和丰富线粒体,细胞核多较居中。米色脂肪细胞(beige adipocyte)可在部分白色脂肪库(fat depot)中被诱导,静息和受刺激状态会明显变化。经典棕色脂肪与部分骨骼肌共享 Myf5\(^+\) 前体谱系,PRDM16 可推动棕色脂肪—肌发生程序转换;beige adipocyte 则具有不同的前体和表达特征,产热脂肪细胞由此包含多种发育来源。14

adipocyte 外围有基底膜(basement membrane),并处在毛细血管、神经、基质祖细胞、fibroblast 和免疫细胞构成的微环境中。脂滴增大要求外围 collagen、laminin 和 proteoglycan 同步重塑;成人脂肪组织也可通过细胞数目变化适应长期能量状态,膨大与增生的相对贡献随 depot 和能量状态而变。白、棕和 beige 脂肪的产热与全身能量作用见器官分工与燃料选择

重塑失衡时,细胞周 collagen 和纤维束积累会限制细胞扩张并改变血流、氧扩散和免疫环境。人肥胖脂肪组织的组织学研究显示,皮下与网膜脂肪的纤维化分布和临床相关性存在差异,ECM 改变需要按脂肪库和组织背景解释。15 脂肪肝主要指肝细胞(hepatocyte)内脂质异常积累,病变细胞类型有别于 adipocyte。

植物细胞壁与共质体连续性

初生壁的复合网络与生长

植物初生细胞壁由纤维素微纤丝(cellulose microfibril)、半纤维素(hemicellulose)、果胶(pectin)和多种结构/调节蛋白构成。纤维素合酶复合体(cellulose synthase complex,CSC)在质膜中移动并把葡聚糖链输出、结晶为 microfibril;活细胞成像表明其运动轨迹与皮层微管阵列相关,微管因此帮助组织纤维素沉积方向,cellulose polymerization 则由 CSC 催化。16 hemicellulose 和 pectin 主要在 Golgi 合成后经胞吐进入细胞壁。

初生壁是相互穿插、局部接触且持续重排的复合网络。pectin 形成富水相并参与孔隙、黏附和离子交联,hemicellulose 与部分 cellulose 表面或 microfibril 接触区相互作用。遗传、固态核磁共振(nuclear magnetic resonance,NMR)与酶学结果支持少量关键接触和多聚物共同承载,具体网络随植物和组织而变。17

细胞膨压为扩张提供驱动力,壁的受控屈服决定扩张方向和速率。扩张蛋白(expansin)可促进特定承载接触处的滑移,木葡聚糖内转糖基酶/水解酶(xyloglucan endotransglucosylase/hydrolase,XTH)、果胶甲酯酶(pectin methylesterase)和多种 hydrolase/transferase 则按组织背景改变壁结构。中胶层富含 pectin,维系相邻细胞的胞外黏附。膨压施力、壁选择性松弛和新材料沉积同步推动生长。

次生壁、木质化与胞间连丝

停止或减慢扩张后的细胞可在初生壁内侧沉积次生壁。次生壁通常含更高比例 cellulose、特定 hemicellulose,并可加入木质素(lignin);多层 microfibril 取向和木质化提高抗弯、抗压与疏水性,支撑木质部输水和植物体。不同细胞类型的次生壁组成差异很大,低 pectin 含量是某些成熟壁的趋势。

胞间连丝穿过细胞壁,外缘由相邻细胞连续的质膜包围,中央连丝微管(desmotubule)源自紧密贴合的内质网,二者之间的胞质套筒(cytoplasmic sleeve)提供受调节的共质体通路。其孔径和形态可随发育和应激改变;颈部胼胝质(callose)的合成与水解是重要门控机制,拟南芥(Arabidopsis thaliana)中不同胼胝质合酶(callose synthase)对机械损伤或病原刺激产生有区别的调节。18 孔道状态、货物性质和主动调节共同决定可通行分子的范围。

实验证据与解释边界

连接和 ECM 横跨纳米结构、细胞力学与组织功能,单一实验通常只覆盖其中一层。可靠结论常来自结构定位、功能扰动和力学读出的组合。

证据路径 直接读出 主要解释边界
薄片电镜、冷冻断裂与冷冻电子断层成像(cryo-ET) 连接带、桥粒致密斑、膜间通道与胞间连丝超微结构 固定、断裂面和取样可改变形态;结构存在不等于通道开放
免疫荧光、活细胞标记与 FRAP 蛋白定位、连接周转、膜域和细胞间示踪物交换 共定位不证明直接结合;漂白恢复混合了扩散、结合和膜交通
跨上皮电阻(transepithelial electrical resistance,TEER)与溶质通量 离子电导和示踪物跨上皮速度 电阻主要反映离子通路,需另测大分子通量;还受细胞面积影响
牵引力显微镜(traction force microscopy)、原子力显微镜(atomic force microscopy,AFM)与单分子拉伸 细胞牵引、局部刚度、蛋白受力构象 探针几何、加载速率和培养基底会改变结果,二维值需结合体内组织环境解释
基因扰动、急性降解与救援实验(rescue) 某一元件对屏障、黏附或材料装配的因果贡献 发育补偿和旁系同源蛋白可掩盖效应;rescue 还需匹配表达量与定位
去细胞化(decellularization)与 ECM 蛋白质组学(proteomics) 组织基质组成及去细胞支架的功能影响 去细胞处理可丢失可溶组分、改变交联,并保留难以辨识的细胞残余

观察到连接蛋白聚集,应继续检验屏障、力传递或通道功能;观察到 ECM 刚度改变,也应区分成分、交联、孔隙与细胞施力的贡献。只有把分子身份、空间结构、动态和组织输出连接起来,才能判断一个界面是在黏附、封闭、通讯,还是同时承担几种任务。

参考资料与延伸阅读


  1. 动物细胞连接、细胞黏附与 ECM 的总体框架见 Cooper 的细胞—细胞相互作用细胞壁与细胞外基质章节。 

  2. 组织结构实质性改编自 osm.bio 的《第十九章 细胞连接和细胞外基质》固定版本,该版本由长河、Sofia 贡献,采用 CC BY-SA 4.0;相关内容经教材和所列研究交叉核验。 

  3. 各类连接的超微结构、跨膜黏附分子及骨架耦联见 Alberts 等的细胞连接章节。 

  4. claudin-1 与 claudin-2 在成纤维细胞中重建紧密连接索的原始证据见 Furuse 等的研究。 

  5. \(\alpha\)-catenin 的力依赖 actin 结合及其对黏着连接动态的作用见 Arbore 等的单分子与细胞研究。 

  6. talin 受力展开并暴露 vinculin 结合位点的单分子证据见 del Rio 等的研究。 

  7. cadherin、selectin、IgSF 与 integrin 的结构、识别和组织功能见 Alberts 等的细胞—细胞黏附章节。 

  8. 人 connexin 26 缝隙连接通道的晶体结构见 Maeda 等的研究。 

  9. collagen 模型肽三股螺旋的高分辨率结构与水合网络见 Berisio 等的研究。 

  10. collagen、elastin、GAG、proteoglycan、fibronectin 与 laminin 的合成和组织见 Cooper 的细胞壁与细胞外基质章节。 

  11. actomyosin 收缩暴露 fibronectin 自组装位点并调节纤维形成的证据见 Zhong 等的研究。 

  12. collagen IV 对 basement membrane 稳定而非最初装配的遗传证据见 Pöschl 等的研究。 

  13. 培养基质弹性改变间充质干细胞形态与谱系偏向的经典实验见 Engler 等的研究。 

  14. PRDM16 控制 Myf5\(^+\) 前体在棕色脂肪与 skeletal muscle 程序间转换的证据见 Seale 等的研究;beige adipocyte 的独立分子特征与诱导性见 Wu 等的研究。 

  15. 人皮下与网膜白色脂肪组织中 collagen 分布、细胞周纤维化及其临床相关性见 Divoux 等的研究。 

  16. 活细胞中 cellulose synthase complex 运动及其与 cortical microtubule 的功能联系见 Paredez 等的研究。 

  17. 初生壁中 cellulose、pectin、hemicellulose 的交织关系、承载接触及生长机制的现代综合见 Cosgrove 的综述。 

  18. 机械损伤和病原刺激下 CalS1/CalS8 调节胞间连丝 callose 与通透性的遗传证据见 Cui 与 Lee 的研究。 

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